CCMB開發(fā)低成本新型測試

細胞和分子生物學(xué)中心(CCMB)的研究人員開發(fā)了一種新的低成本和低技術(shù)要求的SARS-CoV-2測試所需的測試，稱為反轉(zhuǎn)錄巢式PCR(RT-nPCR)測試。

此測試不需要實時定量RT-qPCR。CCMB研究團隊開發(fā)的RT-nPCR已顯示出與標(biāo)準(zhǔn)RT-qPCR測試相當(dāng)?shù)男阅?。嵌套式PCR(RT-nPCR)方法不依賴于RT-qPCR，而是使用標(biāo)準(zhǔn)RT-PCR作為終點分析的一部分。

在比較這兩種測試結(jié)果的過程中，研究人員發(fā)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)的RT-qPCR測試在真實的測試場景中檢測效率可能較低(低于50%)，這可能是由于許多樣品中的病毒代表性較低。這一發(fā)現(xiàn)帶動了直接在測試環(huán)境中監(jiān)視檢測效率的重要性。

“我們開發(fā)并測試了一種RT-nPCR方案，該方案包括用于擴增四個SARS-CoV-2擴增子和對照人擴增子的多重初級RT-PCR，然后是用于單個擴增子的次級巢式PCR。我們還檢查了RT-nPCR在合并檢測中和在不分離RNA的情況下直接擴增中的用途。” CCMB主任Rakesh Mishra說。

使用RT-nPCR檢查從鼻咽拭子樣本中分離的RNA，該樣本先前已使用兩種RT-qPCR測試之一進行了測試，并比較了結(jié)果。發(fā)現(xiàn)將兩個標(biāo)準(zhǔn)RT-qPCR測試結(jié)合在一起，RT-nPCR測試能夠通過RT-qPCR將90%的檢測樣品鑒定為陽性。

在標(biāo)準(zhǔn)RT-qPCR測試陰性的樣本中，它還檢測出13%的樣本為陽性(可能是假陰性)。根據(jù)這項研究中通過RT-nPCR測試通過實驗測得的假陰性率，據(jù)估計，在實際測試場景中，多達50%的陽性樣品在RT-qPCR的單次通過測試中可能逃脫了檢測。

一份聲明說，印度醫(yī)學(xué)研究理事會(ICMR)僅推薦將逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)檢測用于新型檢測。

“這項新測試正在等待ICMR的批準(zhǔn)。我們可能會要求ICMR在沒有RT-qPCR機的地方使用該測試。” Mishra說。